특징

Wnt3a 활성
Wnt3a 활성

혈청의 구성성분 중 하나인 Afamin 단백질이 Wnt3a를 안정화시킴으로써 Wnt가 높은 활성을 나타냅니다

품질 안정성
품질 안정성

TOP FLASH assay로 오가노이드 배양에 충분한 Wnt3a 활성을 나타낸다는 점을 확인하였습니다

무혈청
무혈청

혈청 대신 Afamin 단백질을 함유함으로써 무혈청에서 오가노이드 배양이 가능합니다

인간 대장 유래 오가노이드 배양상

인간 대장 유래 오가노이드 배양상

오가노이드 배양 등에 사용되는 Wnt3a는 무혈청배지에서 충분한 활성을 나타내지 않는 점이 과제입니다.
본 배지는 혈청에서 Wnt3a를 안정화시킨다고 알려져 있는 Afamin 단백질과 Wnt3a를 공발현시킨 배양상청으로 무혈청배지에서 안정적 오가노이드 배양을 실현할 수 있습니다

Afamin/Wnt3a CM의
기본기술

Afamin/Wnt3a CM은 오사카대 단백질연구소 다카키 교수와 게이오기주쿠대 의학부 사토 교수의 공동연구성과인 기술을 도입하여 제품화하였습니다. 안정화된 높은 Wnt3a 활성을 통해 장기간 양호한 오가노이드 배양이 기대됩니다.
2016년 Mihara 등은 혈청성분의 하나인 Afamin 단백질이 Wnt3a와 복합체를 형성함으로써 높은 활성을 유지할 수 있다는 점을 발견하여 Afamin/Wnt3a 복합체를 장기간 오가노이드 배양에 이용할 수 있다는 점을 밝혀냈습니다.

Afamin에 의한 Wnt3a 안정화의 구조

2016년 Mihara 등은 혈청 유래성분인
Afamin 단백질이 Wnt3a와 복합체를 형성함으로써
무혈청배지에서 안정화된다는 점을 발견했습니다

Afamin에 의한 Wnt3a 안정화의 구조

Afamin/Wnt3a 복합체의 높은 활성

TOP FLASH assay로
Afamin/Wnt3a 복합체와 재조합 Wnt3a의 활성을 비교한 결과
안정화된 Afamin/Wnt3a 복합체는 높은 활성을 지닌다는 점을 알 수 있었습니다.

Afamin/Wnt3a 복합체의 높은 활성

출처:Mihara, et al., eLife (2016)[PMID: 26902720]

Afamin/Wnt3a 복합체를 이용한 오가노이드 배양

Afamin/Wnt3a 복합체를
이용한 인간 대장 오가노이드 배양,계대배양을 실시한 결과
기존의 재조합 Wnt3a(R&D) 및 혈청을 포함한
Wnt3a Conditioned Medium에 비해
장기간에 걸쳐 안정된 오가노이드 배양이 가능하다는 점을 알 수 있었습니다.


출처:Mihara, et al., eLife (2016)[PMID: 26902720]

Afamin/Wnt3a CM에 의한
LGR5+세포의 유지 배양

Lgr5프로모터 제어 하에서
tdTomato를 발현하는 오가노이드주를 이용하여
Afamin/Wnt3a CM 및 시판 재조합 Wnt3a를 이용한 오가노이드 배양에서
LGR5+세포 평가를 실시한 결과
Afamin/Wnt3a CM은 높은 수준에서
LGR5+ 세포를 유지하고 있다는 점을 확인할 수 있었습니다.

Afamin/Wnt3a CM

Commercialized recombinant Wnt3a

Negative Control

Nature Protocol 사용농도에 따라 설정

출처:게이오기주쿠대학 의학부
사카구치 미쓰히로 기념강좌(오가노이드의학)사토 도시로 교수와의 공동연구성과

기존의 Wnt3a와 비교

오가노이드 배양에 사용되는 Wnt3a에는 판매중인 재조합 Wnt3a 및 ATCC등에서 배포된 Wnt3a 발현 세포의 Conditioned Medium을 사용하는 방법이 있습니다. 이들 Wnt3a는 오가노이드 배양에 충분한 수준의 Wnt 신호 활성화 평가가 이루어지지 않은 경우가 많아 배양 실패의 원인중 하나가 되고 있습니다.
또한 발현 세포의 Conditioned Medium을 사용하는 경우 Wnt3a 활성 유지를 위해 배지에 혈청이 필요하게 되는데, 혈청의 존재는 오가노이드 제작 및 배양에 영향을 끼친다고 알려져 있습니다. Afamin/Wnt3a CM은 Wnt 활성평가를 마쳤으며, 무혈청으로 사용할 수 있으므로 양호한 오가노이드 배양을 기대할 수 있습니다.

  Afamin/Wnt3a CM Recombinant Wnt3a Wnt3a CM prepared
for lab use
Wnt3a 활성 Afamin 단백질에 의해 안정화된 높은 활성 LGR5+ 줄기세포 유지, 장기간 오가노이드 배양에는 불충분한 활성 혈청에 의해 안정화된 높은 활성
품질 안정성 오가노이드 배양에 충분한 Wnt 신호 활성평가 완료 Wnt 신호 활성평가 완료 Lot to lot Variation이 있어 활성평가의 차이가 큼
혈청의 유무 무혈청 무혈청 혈청을 포함하므로 오가노이드 배양에 영향을 끼침
Afamin/Wnt3a
CM
Recombinant
Wnt3a
Wnt3a CM
prepared
for lab use
Wnt3a 활성
Afamin 단백질에 의해 안정화된 높은 활성
LGR5+ 줄기세포 유지, 장기간 오가노이드 배양에는 불충분한 활성
혈청에 의해 안정화된 높은 활성
품질 안정성
오가노이드 배양에 충분한 Wnt 신호 활성평가 완료
Wnt 신호 활성평가 완료
Lot to lot Variation이 있어 활성평가의 차이가 큼
혈청의 유무
무혈청
무혈청
혈청을 포함하므로 오가노이드 배양에 영향을 끼침

오가노이드 배양용
Afamin/Wnt3a CM에 관하여

Afamin/Wnt3a CM는 Afamin 단백질과 Wnt3a 단백질을 무혈청배지에서 공발현시킨 배양상청(Conditioned Medium)으로 무혈청배지에서 높은 Wnt3a 활성이 기대됩니다.

Afamin/Wnt3a CM 조제방법

Wnt3a
Afamin유전자 도입 세포

유전자 도입 세포의 대량 배양
및 배양배지로의 Afamin/Wnt3a 복합체 분비

배양상청(Conditioned Medium)회수,
멸균필터 처리 후
제품 용기로 분주(활성평가)

Afamin/Wnt3a CM 배지 개요
품명 주성분 포장규격 용액 보존기간
Afamin/Wnt3a CM Mouse Wnt3a
Human Afamin
10 mL Advanced
D-MEM/F12
라벨에 기재
Afamin/Wnt3a CM 배지 개요
품명
Afamin/Wnt3a CM
주성분
Mouse Wnt3a
Human Afamin
포장규격
10 mL
용액
Advanced D-MEM/F12
보존기간
라벨에 기재

사용문헌