특징
혈청의 구성성분 중 하나인 Afamin 단백질이 Wnt3a를 안정화시킴으로써 Wnt가 높은 활성을 나타냅니다
TOP FLASH assay로 오가노이드 배양에 충분한 Wnt3a 활성을 나타낸다는 점을 확인하였습니다
혈청 대신 Afamin 단백질을 함유함으로써 무혈청에서 오가노이드 배양이 가능합니다
인간 대장 유래 오가노이드 배양상
오가노이드 배양 등에 사용되는 Wnt3a는 무혈청배지에서 충분한 활성을 나타내지 않는 점이 과제입니다.
본 배지는 혈청에서 Wnt3a를 안정화시킨다고 알려져 있는 Afamin 단백질과 Wnt3a를 공발현시킨 배양상청으로 무혈청배지에서 안정적 오가노이드 배양을 실현할 수 있습니다
Afamin/Wnt3a CM의
기본기술
Afamin/Wnt3a CM은 오사카대 단백질연구소 다카키 교수와 게이오기주쿠대 의학부 사토 교수의 공동연구성과인 기술을 도입하여 제품화하였습니다. 안정화된 높은 Wnt3a 활성을 통해 장기간 양호한 오가노이드 배양이 기대됩니다.
2016년 Mihara 등은 혈청성분의 하나인 Afamin 단백질이 Wnt3a와 복합체를 형성함으로써 높은 활성을 유지할 수 있다는 점을 발견하여 Afamin/Wnt3a 복합체를 장기간 오가노이드 배양에 이용할 수 있다는 점을 밝혀냈습니다.
Afamin에 의한 Wnt3a 안정화의 구조
2016년 Mihara 등은 혈청 유래성분인
Afamin 단백질이 Wnt3a와 복합체를 형성함으로써
무혈청배지에서 안정화된다는 점을 발견했습니다
Afamin/Wnt3a 복합체의 높은 활성
TOP FLASH assay로
Afamin/Wnt3a 복합체와 재조합 Wnt3a의 활성을 비교한 결과
안정화된 Afamin/Wnt3a 복합체는 높은 활성을 지닌다는 점을 알 수 있었습니다.
Afamin/Wnt3a 복합체를 이용한 오가노이드 배양
Afamin/Wnt3a 복합체를 이용한 인간 대장 오가노이드 배양,계대배양을 실시한 결과
기존의 재조합 Wnt3a(R&D) 및 혈청을 포함한 Wnt3a Conditioned Medium에 비해
장기간에 걸쳐 안정된 오가노이드 배양이 가능하다는 점을 알 수 있었습니다.
Afamin/Wnt3a CM에 의한
LGR5+세포의 유지 배양
Lgr5프로모터 제어 하에서 tdTomato를 발현하는 오가노이드주를 이용하여
Afamin/Wnt3a CM 및 시판 재조합 Wnt3a를 이용한 오가노이드 배양에서 LGR5+세포 평가를 실시한 결과
Afamin/Wnt3a CM은 높은 수준에서 LGR5+ 세포를 유지하고 있다는 점을 확인할 수 있었습니다.
Afamin/Wnt3a CM
Commercialized recombinant Wnt3a※
Negative Control
Nature Protocol 사용농도에 따라 설정
기존의 Wnt3a와 비교
오가노이드 배양에 사용되는 Wnt3a에는 판매중인 재조합 Wnt3a 및 ATCC등에서 배포된 Wnt3a 발현 세포의 Conditioned Medium을 사용하는 방법이 있습니다. 이들 Wnt3a는 오가노이드 배양에 충분한 수준의 Wnt 신호 활성화 평가가 이루어지지 않은 경우가 많아 배양 실패의 원인중 하나가 되고 있습니다.
또한 발현 세포의 Conditioned Medium을 사용하는 경우 Wnt3a 활성 유지를 위해 배지에 혈청이 필요하게 되는데, 혈청의 존재는 오가노이드 제작 및 배양에 영향을 끼친다고 알려져 있습니다. Afamin/Wnt3a CM은 Wnt 활성평가를 마쳤으며, 무혈청으로 사용할 수 있으므로 양호한 오가노이드 배양을 기대할 수 있습니다.
| Afamin/Wnt3a CM | Recombinant Wnt3a | Wnt3a CM prepared for lab use |
|
| Wnt3a 활성 | Afamin 단백질에 의해 안정화된 높은 활성 | LGR5+ 줄기세포 유지, 장기간 오가노이드 배양에는 불충분한 활성 | 혈청에 의해 안정화된 높은 활성 |
| 품질 안정성 | 오가노이드 배양에 충분한 Wnt 신호 활성평가 완료 | Wnt 신호 활성평가 완료 | Lot to lot Variation이 있어 활성평가의 차이가 큼 |
| 혈청의 유무 | 무혈청 | 무혈청 | 혈청을 포함하므로 오가노이드 배양에 영향을 끼침 |
오가노이드 배양용
Afamin/Wnt3a CM에 관하여
Afamin/Wnt3a CM는 Afamin 단백질과 Wnt3a 단백질을 무혈청배지에서 공발현시킨 배양상청（Conditioned Medium）으로 무혈청배지에서 높은 Wnt3a 활성이 기대됩니다.
Afamin/Wnt3a CM 조제방법
Wnt3a 및
Afamin유전자 도입 세포
유전자 도입 세포의 대량 배양
및 배양배지로의 Afamin/Wnt3a 복합체 분비
배양상청(Conditioned Medium)회수,
멸균필터 처리 후
제품 용기로 분주（활성평가）
| Afamin/Wnt3a CM 배지 개요 | |||||
|---|---|---|---|---|---|
| Code No. | 품명 | 주성분 | 포장규격 | 용액 | 보존기간 |
| J2-001 | Afamin/Wnt3a CM | Mouse Wnt3a Human Afamin |
10 mL | Advanced D-MEM/F12 |
라벨에 기재 |
Recombinant Afamin/Wnt3a
Recombinant Afamin/Wnt3a
Recombinant Afamin/Wnt3a는 Afamin 및 Wnt3a과 함께 발현하는 CHO-K1 세포의 배양 상등물질로부터 정제되었습니다.
| Recombinant Afamin/Wnt3a 배지 개요 | ||||
|---|---|---|---|---|
| 제품 번호 | 품명 | 주요 성분 | 규격 | 용매 |
| J2-002 | Recombinant Afamin/Wnt3a | Mouse Wnt3a Human Afamin |
60 µg/300 µl | 20 mM Tris-HCI(pH7.4), 150 mM NaCI |
Recombinant Afamin/Wnt3에 의한
LGR5 Positive Stem Cells의 증가
Lgr5 promoter에 의해 조절된 tdTomato를 발현하는 유기체 균주는 Recombinant Afamin/Wnt3a 및 Recombinant Wnt3a의 경쟁사 제품 A를 사용하여 배양하였습니다. 그 결과 Recombinant Afamin/Wnt3는 낮은 농도에서도 LGR5 Positive Cells를 유지하는 것으로 확인되었습니다.
사용문헌
- E. Mihara, et al., Active and water-soluble form of lipidated Wnt protein is maintained by a serum glycoprotein afamin/α-albumin., eLife 5 (2016) [PMID: 26902720]
- K. Nanki, et al., Divergent routes toward Wnt and R-spondin niche independency during human gastric carcinogenesis., Cell 174 (2018) [PMID: 30096312]
- S. Sugimoto, et al., Reconstruction of the human colon epithelium in vivo., Cell Stem Cell 22 (2018) [PMID: 29290616]
- T. Seino, et al., Human pancreatic tumor organoids reveal loss of stem cell niche factor dependence during disease progression., Cell Stem Cell 22 (2018) [PMID: 29337182]
- S. Sugimoto, et al., Organoid Derivation and Orthotopic Xenotransplantation for Studying Human Intestinal Stem Cell Dynamics., Methods Mol Biol 2171 (2020) [PMID: 32705652]
- K. Nanki, et al., Somatic inflammatory gene mutations in human ulcerative colitis epithelium., Nature 577 (2020) [PMID: 31853059]
- N. Sasaki, et al., Development of a Scalable Coculture System for Gut Anaerobes and Human Colon Epithelium., Gastroenterology 159 (2020) [PMID: 32199883]
- S. Mae, et al., Expansion of Human iPSC-Derived Ureteric Bud Organoids with Repeated Branching Potential., Cell Reports 32 (2020) [PMID: 32726627]
- Y. Nanki, et al., Patient-derived ovarian cancer organoids capture the genomic profiles of primary tumours applicable for drug sensitivity and resistance testing., Scientific Reports 28 (2020) [PMID: 32724113]
- K. Miyabayashi, et al., Intraductal transplantation models of human pancreatic ductal adenocarcinoma reveal progressive transition of molecular subtypes., Cancer Discov 10 (2020) [PMID: 32703770]
- JS. Roe, et al., Enhancer Reprogramming Promotes Pancreatic Cancer Metastasis., Cell 170 (2017) [PMID: 28757253]
- H. Tiriac, et al., Successful creation of pancreatic cancer organoids by means of EUS-guided fine-needle biopsy sampling for personalized cancer treatment., Gastrointest Endosc 87 (2018) [PMID: 29325707]
- H. Tiriac, et al., Organoid Profiling Identifies Common Responders to Chemotherapy in Pancreatic Cancer., Cancer Discov 8 (2018) [PMID: 29853643]
- H. Oshima, et al., Stat3 is indispensable for damage-induced crypt regeneration but not for Wnt-driven intestinal tumorigenesis., FASEB J 33 (2019) [PMID: 30156908]
- M. Fujii, et al., Human Intestinal Organoids Maintain Self-Renewal Capacity and Cellular Diversity in Niche-Inspired Culture Condition., Cell Stem Cell 23 (2018) [PMID: 30526881]
- K. Kawasaki, et al., Chromosome Engineering of Human Colon-Derived Organoids to Develop a Model of Traditional Serrated Adenoma., Gastroenterology 158 (2020) [PMID: 31622618]
- K. Kawasaki, et al., An Organoid Biobank of Neuroendocrine Neoplasms Enables Genotype-Phenotype Mapping., Cell 183 (2020) [PMID: 33159857]
- K. Togasaki, et al., Wnt Signaling Shapes the Histologic Variation in Diffuse Gastric Cancer., Gastroenterology 160 (2021) [PMID: 33217450]
- S. Sugimoto, et al., An organoid-based organ-repurposing approach to treat short bowel syndrome., Nature 592 (2021) [PMID: 33627870]
- T. De Oliveira, et al., Effects of the Novel PFKFB3 Inhibitor KAN0438757 on Colorectal Cancer Cells and Its Systemic Toxicity Evaluation In Vivo., Cancers (Basel) 13 (2021) [PMID: 33671096]
- T. Nishina, et al., Interleukin-11-expressing fibroblasts have a unique gene signature correlated with poor prognosis of colorectal cancer., Nat Commun 12 (2021) [PMID: 33863879]
- T. Ebisudani, et al., Direct derivation of human alveolospheres for SARS-CoV-2 infection modeling and drug screening., Cell Rep 35 (2021) [PMID: 34038715]
- D. Kim, et al., 3D Organoid Culture From Adult Salivary Gland Tissues as an ex vivo Modeling of Salivary Gland Morphogenesis., Front Cell Dev Biol 9 (2021) [PMID: 34458260]
- EA. Farshadi, et al., Organoids Derived from Neoadjuvant FOLFIRINOX Patients Recapitulate Therapy Resistance in Pancreatic Ductal Adenocarcinoma., Clin Cancer Res 27 (2021) [PMID: 34580113]
- YW. Cho, et al., Patient-derived organoids as a preclinical platform for precision medicine in colorectal cancer., Mol Oncol (2021) [PMID: 34850547]
- K. Ikezawa, et al., Establishment of organoids using residual samples from saline flushes during endoscopic ultrasound-guided fine-needle aspiration in patients with pancreatic cancer., Endosc Int Open 10 (2022) [PMID: 35036290]
- K. Toshimitsu, et al., Organoid screening reveals epigenetic vulnerabilities in human colorectal cancer., Nat Chem Biol 18 (2022) [PMID: 35273398]
- Z. Wang, et al., Lactate promotes the growth of patient-derived organoids from hepatopancreatobiliary cancers via ENO1/HIF1α pathway and does not affect their drug sensitivities., Cell Death Discov 8 (2022) [PMID: 35443744]
- C. Cao, et al., Phenotypical screening on metastatic PRCC-TFE3 fusion translocation renal cell carcinoma organoids reveals potential therapeutic agents., Clin Transl Oncol (2022) [PMID: 35118587]